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        技術文章   Article首頁>>技術文章>>細胞爬片的免疫組化染色的操作步驟

        細胞爬片的免疫組化染色的操作步驟

        點擊次數:605 發布時間:2016-08-26

        細胞爬片的免疫組化染色的操作步驟
        1. 取出細胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20~30 分鐘
        2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。
        3. 打孔液浸泡 5 分鐘。
        4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。
        注:第 3、4 步僅用于檢測細胞內抗原,檢測細胞膜抗原時不用。
        5. 正常血清封閉:從染片缸中取出切片,擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分 (保持組織呈濕潤狀態,)滴加正常山羊或兔血清 (與第二抗 體 同源動物血清)處理,37℃,15 分鐘。
        附:正常血清配制 ( 或按試劑盒規定的濃度配制):按 1:20比例,用 PBS 配制,每張切片需要量按 50μ+5μl (10%拋灑量) 計算。
        6. 滴加*抗體:用濾紙吸去血清,不洗,直接滴加*抗體,37℃ 2 小時(也可置于 4℃冰箱過夜) 。
        7. PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
        8. 滴加生物素化的二抗,37℃,40 分鐘。
        9. PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
        10. 滴加三抗 (SAB 復合物) ,37℃,40 分鐘。
        11. PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床) 。
        12. DAB 顯色,鏡下觀察,適時終止(自來水沖終止) 。
        附:DAB 的配制① 儲備液(DAB 25mg/ml)的配制:DAB 250mg + PBS 10ml,待完全溶解后分裝成 1ml,100μl,50μl ,20μl 等,-20℃,凍存。② 工作液:DAB 儲備液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl
        13. 自來水(細水)充分沖洗。
        14. 蘇木素復染,室溫,30 秒,自來水沖洗。
        15. 自來水沖洗返藍,15 分鐘。
        16. 梯度酒精脫水:80%,2 分鐘 95%,2 分鐘 100%,2 次,5 分鐘。
        17. 二甲苯透明:I ,II (二甲苯)各 5 分鐘
        18. 封片:加拿大樹膠(或中性樹膠)封片。

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